Proyectos de investigación

E l objetivo fundamental de este Proyecto se centró en investigar el papel de la señalización purinérgica en el desarrollo cortical humano y su implicación potencial en el diseño de futuras estrategias terapéuticas contra las malformaciones corticales. Para ello, planeamos utilizar las prometedoras posibilidades abiertas por el método de los organoides cerebrales para realizar un estudio fenotípico completo, así como para descubrir qué genes y vías de señalización están involucrados en el modelo cortical humano. Concretamente, nuestro objetivo es i) caracterizar la expresión y función del sistema purinérgico durante del desarrollo cortical tanto a nivel de célula única, como a nivel del organoide completo y ii) Mejorar el método de cultivo de organoides.

A lo largo del desarrollo este proyecto hemos conseguido los siguientes objetivos:

-Mejora y consolidación del cultivo de organoides.

-Análisis de la expresión de los receptores purinérgicos y el transportador vesicular de nucleótidos (VNUT) por inmunohistoquímica, Western Blot y por mRNA tanto en los dominios neuronales como de progenitores neurales en la corteza en desarrollo.

-Análisis de los niveles de mRNA y Western Blot durante la formación de los organoides (hiPSCs, Embryonic Bodies…)

-Experimentos preliminares de electroporación de los organoides con vectores de sobreexpresión y silenciamiento del P2X7.

-Optimización y puesta a punto del cultivo 2D que nos ha permitido realizar análisis funcionales de los receptores tanto por microfluorimetría de calcio como por patch clamp.

- Cultivo de organoides en presencia/ausencia de agonistas y antagonistas purinérgicos para evaluar el impacto de la señalización purinérgica en su formación.