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Bacterias de metabolismo programable para la valoración de residuos plásticos (PROGSTRAIN)

XXI Concurso Nacional para la adjudicación de Ayudas a la Investigación en Ciencias de la Vida y de la Materia

Seguridad alimentaria y biotecnología

Investigador Principal: Sergio Bordel Velasco

Centro de investigación o Institución: Universidad de Valladolid

Sinopsis

Diseñar un Sistema Basado en Proteínas CRISPR para Dirigir el Metabolismo de Paracoccus denitrificans. Los principales resultados obtenidos desde el informe anterior se resumen a continuación.

RESULTADOS:

• Obtención del plásmido ProgStrain: Este plásmido codifica para un sistema ortogonal de proteínas Cas para sobreexpresar el gen de la lactato-deshidrogenasa y reprimir el gen de la piruvato deshidrogenasa. Se ha introducido el plásmido en Escherichia coli para su conservación, modificación y producción.

• Elaboración de los procedimientos para la extracción de RNA de Paracoccus denitrificans y su uso para RT-qPCR: Se ha elaborado un protocolo de extracción de RNA a partir de un cultivo líquido de Paracoccus denitrificans, con un rendimiento de al menos 200 ng/microL, y de tratamiento con DNasaI para eliminar posibles contaminaciones de DNA.

• Optimización de los protocolos de RT-qPCR: Se han optimizado los parámetros de la RT-qPCR y las cantidades a utilizar de las tres parejas de primers escogidas, las de los genes lactato deshidrogenasa y piruvato deshidrogenasa cuya expresión se evaluará, y la del gen de la subunidad β de la RNA polimerasa como gen de referencia para el análisis cuantitativo. Y se ha calculado la eficiencia de las tres parejas de primers, necesario para el posterior análisis cuantitativo. En las gráficas mostradas abajo se observa el aspecto típico de las curvas de qPCR.

 

Producción Científica
  
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